Avaliou-se o efeito do citrato em meio CR2aa suplementado com soro fetal bovino (SFB) ou livre de proteínas séricas e sua associação com taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro. Embriões foram cultivados em CR2aa contendo 0, 0,5, 1,0 e 3,0mM citrato, suplementado com 10% SFB (experimento 1) ou com álcool polivinil (PVA; experimento 2). No terceiro experimento, embriões foram cultivados em meio com 0,5mM citrato, ou 7mM taurina, ou com a associação de ambos, suplementado com SFB. Os cultivos foram realizados com células do cumulus em ambiente a 38,8ºC com 5% de CO2 em ar atmosférico. Melhora no desenvolvimento embrionário foi observado no cultivo de embriões em CR2aa com 0,5 e 1,0mM citrato na ausência de SFB (P<0,05), 8,6% e 11,3% de blastocistos, respectivamente, porém com valores mais baixos (P<0,05) que embriões cultivados em CR2aa com SFB (31,9%). Associação de citrato com taurina em meio com SFB não influenciou (P>0,05) a produção de embriões ou o número de células. Citrato em meio CR2aa pode ser uma alternativa para cultivo embrionário em condições atmosféricas com 5% de CO2 em ar na ausência de proteína sérica.

The effect of citrate added to CR2aa medium supplemented with fetal calf serum (FCS) or serum-proteinfree and its association with taurine on the development of in vitro-fertilized bovine embryos was evaluated. Embryos were cultured with 0, 0.5, 1.0, and 3.0mM citrate, in CR2aa supplemented with 10% FCS (experiment 1), or polyvinyl alcohol (PVA; experiment 2). In experiment 3, embryos were cultured with 0.5mM citrate, 7.0mM taurine or with association of both, in medium supplemented with FCS. Embryo culture was performed with cumulus cells at 38.8ºC in 5% CO2 under air for all experiments. Positive effect on embryo development was only observed with 0.5 and 1.0mM citrate in FCS-free CR2aa (P<0.05; 8.6% and 11.3% blastocyst, respectively), however with lower embryo rate than CR2aa with FCS (31.9%). Association between citrate and taurine in medium supplemented with FCS did not affect (P>0.05) embryo rate nor total cell number. Citrate in CR2aa medium can be an alternative for serumfree embryo culture under 5% CO2 in air, absence of serum protein.

Caracterizaram-se o padrão de crescimento folicular e a função lútea ao longo do ciclo estral em vacas da raça Guzerá (n=5), multíparas, não-lactantes. Os animais utilizados apresentavam idade e condição corporal semelhantes e peso corporal médio de 518± 48.5kg. A dinâmica folicular foi monitorada diariamente a partir do dia da ovulação, durante dois ciclos consecutivos, utilizando-se um aparelho de ultra-sonografia equipado com uma probe linear retal de 5MHz. Amostras de sangue foram coletadas a cada 48h, a partir do momento da ovulação, durante os dois ciclos. O primeiro ciclo foi sincronizado pela administração de um luteolítico (cloprostenol), e o segundo foi natural. Os folículos foram identificados e mensurados; e os dados obtidos, registrados em função do dia do ciclo. O comprimento do ciclo estral foi de 19,10± 1,86 dias. Observou-se maior incidência de ciclos com três ondas de crescimento folicular (50%), mas ciclos com duas (37,5%) ou quatro ondas (12,5%) também foram identificados. O diâmetro máximo dos folículos dominantes não ovulatórios foi de 11,60± 2,37 mm, e dos folículos ovulatórios de 14,4± 0,5 mm. A taxa de crescimento dos folículos dominantes da primeira, segunda, terceira e quarta onda foi de 1,48± 0,60; 0,81± 0,13; 1,10± 0,27 e 1,33mm/dia, respectivamente. A concentração máxima de progesterona no diestro foi de 5,50± 0,92ng/ml. A raça Guzerá apresenta características da dinâmica folicular semelhantes àquelas observadas em outras raças zebuínas, como a tendência ao maior número de ondas de crescimento associadas à menor taxa de crescimento, diâmetro máximo e persistência dos folículos dominantes das ondas intermediárias.

The follicular growth pattern and luteal function during the estrous cycle were studied using multiparous, non-lactating Guzerá cows (n=5). The animals presented similar age, body score condition, and mean body weight of 518 ± 48.5kg. Follicular dynamics was daily monitored between ovulations during two consecutive estrous cycles, using an ultrasound device equipped with a linear rectal 5MHz transducer. Blood samples were collected each 48h after ovulation, during the evaluated cycles. The first cycle was synchronized using a luteolytic agent (cloprostenol), and the second estrous cycle was natural. Follicles were identified and measured, and data were individually recorded according to the day of the cycle. The mean length of the cycles was 19.10 ± 1.86 days. There was a higher incidence of cycles presenting three follicular growth waves (50%), but cycles presenting two (37.5%) or three (12.5%) waves were also observed. The maximum diameter of non-ovulatory follicles was 11.60± 2.37mm, and that of ovulatory follicles was 14.40± 0.50mm. The growth rate of dominant follicles during the first, second, third and fourth waves were 1.48 ± 0.60; 0.81 ± 0.13; 1.10 ± 0.27 and 1.33mm/day, respectively. Progesterone maximum concentration during diestrus was 5.50± 0.92ng/ml. These results show that the Guzera breed presents characteristics of the follicular dynamics similar to those observed in other Zebu breeds, like the trend to a higher number of follicular waves associated with lower growth rate, maximum diameter and persistence of the dominant follicles emerging during non-ovulatory waves.

Determinaram-se as características andrológicas de touros da raça Gir, classificando-os quanto ao seu potencial reprodutivo, utilizando-se o sistema de classificação andrológica por pontos (CAP). Os animais foram separados em três grupos: G1= animais de 18-24 meses (n=33), G2 = 25-31 meses (n=24) e G3 = 32-38 meses (n=12). A média da circunferência escrotal no G1 foi menor (P<0,05) do que nos G2 e G3. A motilidade (%) e o vigor não diferiram entre os grupos. As taxas (%) de defeitos maiores e totais foram maiores (P<0,05) no G1 do que nos G2 e G3. Para as características andrológicas não houve diferenças entre G2 e G3. Com relação ao CAP, G1, G2 e G3 apresentaram, respectivamente, 25,7%, 58,3% e 61,5% de animais aptos à reprodução; 11,4%, 20,8% e 15,4% questionáveis e 57,1%, 12,5% e 15,4% inaptos ou imaturos. A idade dos touros Gir influenciou a circunferência escrotal e os defeitos maiores e totais, mas não a motilidade e o vigor. Maior proporção de animais aptos à reprodução ocorreu após 24 meses de idade.

Gyr bulls were ranked regarding their reproductive potential, following evaluations through the score-based andrological classification system (ACP). For the examinations, three animal age groups were considered: 18 to 24 month-old (G1, n=33), 25 to 31 month-old (G2, n=24), and 32 to 38 month-old (G3, n=12). Scrotal circumference was lower in G1, as compared to G2 and G3 (P<0.05). Percent motility and vigor were not affected by the age groups. Percent rates of major and total defects were higher (P<0.05) in G1 than in G2 or G3. No significant differences were observed when G2 and G3 were compared. Regarding ACP data, G1, G2 and G3 yielded, respectively, 25.7, 58.3 and 61.5% of adequate breeders; 11.4, 20.8 and 15.4% of bulls with undefined breeding capacity, and 57.1, 12.5 and 15.4% of inapt breeders or immature animals. Age group affected scrotal circumference and major and total defects, but did not influence motility or vigor. The highest proportion of adequate breeders was obtained with 24-month-old bulls and older.

Avaliaram-se os efeitos de dois protocolos de punção folicular na quantidade/qualidade dos oócitos e na produção in vitro de embriões, em vacas da raça Gir, não-lactantes. O ciclo estral foi sincronizado com cloprostenol e ao longo do experimento os animais receberam implantes auriculares de norgestomet, renovados a cada 14 dias. Os animais foram submetidos aos protocolos I (sem estimulação hormonal, com punção folicular duas vezes/semana) e II (pré-tratamento com 250 UI de FSH em doses decrescentes, três dias antes da punção folicular). Os oócitos recuperados foram levados ao laboratório em meio TALP-Hepes e submetidos à maturação. Na fecundação in vitro utilizou-se sêmen de touro Gir, previamente capacitado. Após 22 horas de fecundação, os prováveis zigotos foram co-cultivados com células da granulosa em CR2aa acrescido de 10% de soro fetal bovino. A taxa de clivagem foi avaliada 72 horas pós-fecundação e a de blastocisto 192 horas pós-fecundação. O número total de folículos foi maior (P<0,05) no protocolo II, assim como o número de folículos grandes e médios (P<0,05) e o diâmetro do maior folículo (P<0,05), sendo o número de folículos pequenos (P<0,05) menor. O total de oócitos recuperados por sessão não foi diferente entre os protocolos I e II (P>0,05). O número de oócitos de grau I e a taxa de clivagem foram maiores (P<0,05) e o número de degenerados menor protocolo II. A pré-estimulação ovariana com FSH pode melhorar a qualidade e a taxa de clivagem dos oócitos recuperados por punção folicular em animais Gir.

The effect of two ovum pick-up protocols on amount/quality of oocytes retrived and on in vitro embryo production of Gyr cows was evaluated in non-lactating cycling cows with good body and reproductive conditions. Estrous cycles were synchronized with cloprostenol. During the experiment, animals received norgestomet ear implants, replaced every 14 days. Animals were submitted to protocol I (without hormonal estimulation) and protocol II (pre-stimulation with 250 IU of FSH three days before aspiration). Recovered oocytes were transported in Talp-Hepes to the laboratory, classified and maturated. Twenty two hours after fertilization, presumptive zygotes were co-culture with granulosa cells in CR2aa supplemented with 10% of fetal calf serum. Cleavage rate was assessed at 72 hours post-fertilization, and blastocyst production 192 hours post-fertilization. The total number of follicles, the number of large and medium follicles and the diameter of the largest follicle were higher (P<0.05) in protocol II, and the number of small follicles (P<0.05) was lower than in protocol I. No difference between protocols I and II was observed for oocytes recovered per aspiration section (P>0.05). The number of grade I oocytes and cleavage rate were higher (P<0.05) in protocol II and the number of degenerated oocytes was lower (P<0.05). The pre-stimulation with FSH can improve the quality and cleavage rate of oocytes recovered by ovum pick-up in zebu animals.

Estudou-se o efeito da concentração espermática e período de incubação e da interação dessas características sobre a fecundação in vitro (FIV) usando-se sêmen de touros Guzerá. Oócitos (n=1146) maturados in vitro foram divididos em tratamentos objetivando a FIV, em esquema fatorial 3×2×2 (três touros - A, B e C, duas concentrações espermáticas - 2 e 4×10(6) espermatozóides/ml e dois tempos de incubação 12 e 18 horas). Utilizaram-se espermatozóides viáveis obtidos por swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5% de CO2 e 95% de umidade, a 38,5°C. Após incubação, 50% dos oócitos foram fixados e corados para determinação das taxas de penetração, fecundação monoespermática e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da granulosa em meio CR2aa por oito dias, avaliando-se a taxa de clivagem e a produção de blastocisto. Houve maior taxa de penetração (P<0,05) na concentração de 4×10(6) espermatozóides/ml por 18 horas (64%), e não se observou diferença (P>0,05) entre os demais tratamentos. A taxa de poliespermia foi maior (P<0,05) na concentração espermática de 4×10(6), independente do tempo de incubação. Na concentração espermática mais alta, a taxa de poliespermia foi maior no tempo de incubação de 18 horas (P<0,05). O touro A apresentou menor (P<0,05) taxa de poliespermia em relação aos demais. Ainda, no touro A a taxa de clivagem foi maior (P<0,05) que no touro B, enquanto o C mostrou-se semelhante tanto ao A quanto ao B. O tempo de incubação, a concentração espermática e a interação das variáveis influenciaram as taxas de penetração e poliespermia, sem interferir na taxa de fecundação monoespermática e na produção de blastocistos.

The effects of sperm concentration, incubation period and their interaction on in vitro fertilization (IVF) using sperm of Guzera bulls were evaluated. In vitro matured oocytes (n=1146) were allotted to IVF treatments in a factorial scheme 3×2×2 - three bulls (A, B and C), two sperm concentrations (2 and 4×10(6) spermatozoa/ml) and two incubation periods (12 and 18h). Viable spermatozoa were obtained by swim-up. The IVF was performed using in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5% CO2 and 95% humidity, at 38.5ºC. After the incubation, 50% of oocytes were fixed and stained to determine penetration, monospermic fecundation and polyspermy rates. The remainder was co-cultured with granulosa cells in CR2 medium for eight days to evaluate cleavage and embryo production rates. The penetration rate was higher (P<0.05) for sperm concentration of 4×10(6) spermatozoa/ml incubated for 18 hours (64%), and no differences (P>0.05) among remainder treatments were observed. The polyspermic rate (P<0.05) was higher for higher sperm concentration and incubation period. Bull A showed the lowest (P<0.05) polyspermy rate. Bulls A and C showed higher (P<0.05) cleavage than bull B. Incubation period, sperm concentration, and interaction of these two factors influenced penetration and polyspermy rates, without any effect on monospermic fecundation rates and embryos production.

Avaliou-se a interferência da criopreservação sobre a secreção de interferon-tau (IFN-tau) por embriões bovinos produzidos in vitro. Usaram-se dois grupos de tratamentos: I) constituído por embriões não criopreservados (fresco) e II) embriões criopreservados. Os embriões, após atingirem a fase de blastocisto (fresco ou imediatamente após o descongelamento dos criopreservados), continuaram a ser cultivados individualmente por mais sete dias. Do meio de cultivo em que se mantiveram os blastocistos retiraram-se alíquotas com três e sete dias do início do cultivo, para a avaliação da secreção de IFN-tau pelos embriões cultivados. Os embriões congelados secretaram menos IFN-tau do que aqueles não criopreservados (P<0,05), e com sete dias houve maior secreção do interferon do que com três dias (P<0,05). A criopreservação prejudicou a produção de IFN-tau pelo trofoblasto e pode comprometer o reconhecimento materno da gestação e o desenvolvimento do embrião pós-descongelamento.

The effect of cryopreservation in IFN-tau, from bovine embryos produced in vitro was evaluated. Two treated groups (G1= fresh bovine embryos, n=59 and G2= freezed embryos, n=84) were used to study the effect of cryopreservation on IFN-tau secretion. After reaching the blastocyst phase, the embryos were kept on individual culture for additional period of 7 days. On days 3 and 7 after the beginning of embryos cultivation, samples of the media culture were taken for IFN-tau secretion titration. Oocysts taken from follicles ranging from 3 to 5mm in diameter were obtained from ovaries of females at slaughterhouse. The embryos were frozen, after being dehydrated with ethylene glycol (1.8m), conditioned on 0.5ml palletes and frozen. Frozen embryos secreted lower IFN-tau than fresh embryos (P<0.05). At day 7 it was registered higher IFN-tau secretion from trophoblast than at day 3 (P<0.05). The increasing of IFN-tau secretion was observed when the blastocyst began to longed and it was directly related to the embryos development. The synthesis of IFN-tau is related to the capability of development of the blastocyst. Cryopreservation is a method that affects the maternal recognition of pregnancy and the post-freezing embryo development.

Avaliou-se o efeito da suplementação de meios de cultivo sobre o desenvolvimento e proporção do sexo de embriões bovinos fertilizados in vitro. Complexos cumulus-oócitos obtidos de ovários de matadouro foram maturados e fertilizados in vitro. Os zigotos (n= 484) foram distribuídos aleatoriamente em meio CR2aa, contendo soro fetal bovino (SFB) (T1), albumina sérica bovina (BSA) (T2) ou BSA mais insulina:transferrina:selênio e vitaminas (BSA+) (T3), no cultivo embrionário in vitro, a uma atmosfera de 5% CO2 a 38,8ºC em ar. A taxa de clivagem foi observada 72-76 horas pós-fertilização (PF) e a taxa de blastocistos com sete e oito dias PF. Os blastocistos (n= 63) foram sexados pela técnica de reação em cadeia de polimerase. A taxa de clivagem em T2 foi maior (P<0,05) do que em T1 e T3. A taxa de blastocistos foi similar (P>0,05) entre T2 e T3, porém menor (P<0,01) do que em T1. A proporção do sexo dos embriões não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos. O T1 influenciou o desenvolvimento de blastocistos, mas não teve efeito sobre a proporção do sexo.

The effect of culture media on the development and on the sex ratio of bovine embryos fertilized in vitro was studied. Cumulus oocyte-complexes from slaughterhouse ovaries were matured and fertilized in vitro. Zygotes (n= 484) were randomly allotted to different culture media and cultured with their cumulus cells in CR2aa medium and an atmosphere of 5% CO2 in air at 38.8ºC. The fetal calf serum (FCS), bovine seric albumin (BSA) or BSA plus insulin:transferrin:selenium and vitamins (BSA+) supplementation effect on embryo culture was evaluated. Cleavage rate was assessed at 72-76h post-fertilization (PF) and blastocyst rate on days 7 and 8 PF. The blastocysts (n= 63) were also sexed using polymerase chain reaction. Cleavage rate for BSA medium supplemented was higher (P<0.05) than FCS and BSA+. Blastocyst rates for BSA and BSA+ media were similar (P>0.05), but lower (P<0.01) than FCS. Culture medium FCS supplemented affected blastocyst development but not the sex ratio.

Estudou-se o efeito da pré-maturação em fluido folicular bovino (FFb) sobre o potencial de desenvolvimento de ovócitos bovinos imaturos. Complexo cumulus- ovócitos (CCO) e FFb foram obtidos de ovários coletados em matadouro. O FFb foi inativado e os CCOs imaturos distribuídos em quatro tratamentos: (T1) 70% de FFb em Talp Hepes, (T2) 100% de FFb, (T3) 100% de Talp Hepes, e (T4) controle. Em T1, T2 e T3 os CCOs foram pré - maturados por cinco horas a 37ºC em ar e posteriormente maturados in vitro. Em T4 a maturação ocorreu logo após a aspiração. Depois de fecundados in vitro, os ovócitos foram co-cultivados com células do cumulus por 10 dias. Avaliaram-se as taxas de clivagem, de produção de blastocistos no sétimo e oitavo dias pós- fecundação (PF), de produção total e de blastocistos eclodidos no oitavo e nono dias PF. Calcularam-se as taxas de blastocistos no sétimo e oitavo dia e de blastocistos eclodidos em função do total de blastocistos produzidos. As taxas de clivagem, de produção total e de blastocistos eclodidos não diferiram entre os tratamentos (P>0,05), entretanto a produção de blastocistos no sétimo dia foi menor nos tratamentos com FFb e Talp Hepes (P<0,05). Concluiu-se que FFb e Talp Hepes na pré-maturação por cinco horas atrasam o desenvolvimento embrionário sem comprometer a taxa de produção total de embriões ou sua viabilidade.

The effect of the pre-maturation with bovine follicular fluid (bFF) on developmental competence of immature bovine oocytes was studied. Cumulus-oocytes complexes (COC) and bFF were obtained from ovaries collected at slaughterhouse. bFF was inactivated prior to use and COCs were distributed in four treatments: (T1) 70% of bFF in Talp hepes, (T2) 100% of bFF, (T3) 100% of Talp Hepes medium, and (T4) control group. In T1, T2, and T3, COCs were incubated during 5h at 37ºC before proceeding with in vitro maturation. In T4, maturation was performed soon after follicular aspiration. After in vitro fertilization, the presumptive zygotes were co-cultured with cumulus cells during 10 days. It was evaluated cleavage, blastocyst on seventh and eighth days post-fertilization (PF), overall blastocyst and hatched blastocyst on eighth and ninth days PF. It was also calculated the ratio of blastocyst on seventh and eighth days, and hatched blastocyst in function of overall blastocyst production. Cleavage, overall blastocyst and hatched blastocyst rates were similar (P>0.05) among treatments. However, blastocyst production on seventh day was lower (P<0.05) for bFF and Talp Hepes. These results indicate that bFF and Talp Hepes in pre-maturation for five hours caused a delay on embryonic development, although the overall blastocyst production and viability were not affected.

Avaliaram-se os efeitos da pré-estimulação ovariana com FSH e da imunização ativa contra inibina suína sobre o número e classificação morfológica de oócitos recuperados por punção folicular. Catorze vacas da raça Gir, pluríparas e não-lactantes, foram distribuídas em: TI - submetidas a pré-estimulação com 250 UI de FSH (n=4), TII - submetidas a imunização ativa contra inibina suína (n=4) e TIII - não tratadas (n=6; controle). Todos os animais tiveram seus folículos com diâmetro superior a três milímetros aspirados uma vez por semana, durante 10 semanas consecutivas. O TI apresentou aumento na população folicular total (P<0,05) e no número de folículos puncionados (P<0,001), porém a taxa de recuperação foi inferior à dos tratamentos II e III (68,8% vs. 78,4% e 76,3%, respectivamente; P<0,01). O TII não afetou as principais características ovarianas, exceto pelo aumento no número de folículos de tamanho médio (P<0,01). O TI produziu maior percentual de oócitos viáveis (77,2% vs. 69,8%; P<0,05) e de oócitos de Grau I (19,8% vs. 11,6%; P<0,001) do que o TIII. Os tratamentos I e II reduziram o percentual de oócitos degenerados (16,4% e 16,8% vs. 22,3%; P<0,05). A pré-estimulação ovariana com FSH demonstrou ser a alternativa mais consistente para aumentar a qualidade dos oócitos recuperados de vacas zebuínas.

The aim of this study was to evaluate the effects of ovarian pre-stimulation with FSH and active immunization against swine inhibin on the number and quality of oocytes recovered by follicular puncture. Pluriparous, non-lactating Gir cows (n=14) were distributed as: TI - pre-treatment with 250 IU of FSH (n=4), TII - active immunization against swine inhibin (n=4) and TIII - not treated (n=6; control group). All animals had their ovarian follicles above three millimeters in diameter aspirated once a week during 10 consecutive weeks. The TI presented an increase in total follicular population (P<0.05) and in the number of punctured follicles (P<0.001), but reduced recovery rate when compared to treatments II and III (68.8% vs. 78.4% and 76.3%, respectively; P<0.01). The TII did not affect the main ovarian characteristics, except for an increase in the number of medium follicles (P<0.01). Treatment I yielded a higher percentage of viable oocytes (77.2% vs. 69.8%; P<0.05) and oocytes Grade I (19.8% vs. 11.6%; P<0.001) than TIII. Both treatments I and II resulted in reduction of the percentage of degenerated oocytes (16.4% and 16.8% vs. 22.3%; P<0.05). Ovarian pre-stimulation with FSH was the most consistent treatment for increasing quality of oocytes recovered from Zebu cattle.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro em meio de cultivo com diferentes fontes de soro. No experimento 1, zigotos (n=440) fecundados in vitro foram distribuídos aleatoriamente nos tratamentos com 0, 3, 7 ou 14 mM de taurina em meio de cultivo acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB) e 3g/l de albumina sérica bovina (BSA). No experimento 2, os zigotos (n=940) foram divididos nos tratamentos com 0, 3 ou 14 mM de taurina em meio acrescido de 10% de SFB ou 3g/l de BSA. No experimento 3, os zigotos (n=191) foram divididos nos tratamentos com 0 ou 3 mM de taurina em meio de cultivo sem fonte de soro, porém adicionado de 3 g/l de álcool polivinil. Nos experimentos 1 e 2 não se observou diferença (P>0,05) na taxa de clivagem, na produção de blastocistos e no número de células entre as concentrações de taurina avaliadas. No experimento 3 encontraram-se maior (P<0,05) taxa de clivagem (68,5% vs. 16,9%) e produção de blastocistos (8,3% vs. 0%) na presença de taurina. O cultivo de zigotos em meio adicionado de SFB produziu maior (P<0,01) taxa de blastocistos no sétimo (25,6% vs. 6,7%) e oitavo (30,8% vs. 13,9%) dia pós-fecundação e número de células/blastocistos (104,8± 2,63 vs. 84,7± 3,86) do que no cultivo com BSA, apesar de menor (P<0,01) taxa de clivagem (58,1% vs. 71,3%). Conclui-se que o efeito benéfico da taurina no desenvolvimento embrionário somente é observado na ausência de SFB e BSA. O SFB produz menor taxa de clivagem mas melhora o desenvolvimento embrionário após as primeiras divisões celulares.

The effect of different taurine concentrations on bovine embryo development in medium supplemented with different serum sources was studied. In the first experiment, in vitro fertilized zygotes (n=440) were divided into treatments with 0, 3, 7 or 14 mM of taurine in culture medium supplemented with 10% of fetal calf serum (FCS) and 3g/l of bovine serum albumin (BSA). In the second experiment, zygotes (n=940) were divided into treatments with 0, 3 or 14 mM of taurine in cultured medium supplemented with 10% of FCS or 3g/l of BSA. In the third experiment, zygotes (n=191) were divided into treatments with 0 or 3 mM of taurine in culture medium without serum source, even so supplemented with 3g/l of polyvinyl alcohol. In the first and second experiments no differences (P>0.05) in cleavage rate, blastocyst production and cells number among the concentrations of taurine were observed. In the third experiment, taurine increased (P<0.05) cleavage rate (68.5% vs. 16.9%) and blastocysts production (8.3% vs. 0%). The culture of zygotes in medium supplemented with FCS produced more (P<0.01) blastocyst in the seventh (25.6% vs. 6.7%) and eighth (30.8% vs. 13.9%) day post-fertilization and total cells number/blastocysts (104.8± 2.63 vs. 84.7± 3.86) than in medium with BSA, despite lower (P<0.01) cleavage rate (58.1% vs. 71.3%). In conclusion, taurine only has a beneficial effect in the embryo development in culture medium in the absence of FCS and BSA. Fetal calf serum decreases cleavage rate, however, it improves the embryo development after the early cleavage.

O efeito da interrupção da gestação sobre a fertilidade foi avaliada em 50 novilhas da raça Holandesa, gestantes de fetos do sexo masculino entre 55 e 90 dias de idade. O aborto foi induzido pela administração de cloprostenol sódico, após o diagnóstico do sexo fetal. Os animais foram inseminados no segundo estro normal após o aborto. A interrupção da gestação ocorreu em 86% dos animais tratados e a via de administração, intramuscular ou intravulvar, não afetou a taxa de aborto. Os intervalos do aborto à primeira inseminação e do aborto à concepção foram de 38,94± 4,96 e 47,32± 15,89 dias, respectivamente. Não houve diferença no número médio de serviços por concepção pré e pós-interrupção da gestação (1,22 vs. 1,34; P>0,05). Conclui-se que a indução do aborto no terço inicial da gestação em novilhas não compromete a fertilidade dos animais.

The effect of interruption of pregnancy on fertility was evaluated in 50 Holstein heifers, carrying male fetuses ranging from 55 to 90 days post conception. Abortion was induced by administration of sodic cloprostenol after fetal gender diagnosis. Heifers were inseminated on the second normal estrus after abortion. The interruption of gestation was 86% in treated animals, and route of administration, IM ou IV (intra-vulvar), did not affect the rate of abortion. The abortion to first insemination and abortion to conception intervals were 38.94± 4.96 and 47.32± 15.89 days, respectively. No difference on the number of inseminations per conception before or after the interruption of pregnancy (1.22 vs. 1.34; P>0.05) was observed. It was conclude that abortion induction in the first third of pregnancy did not affect heifer fertility.

Ultrasound-assisted follicular puncture is a technique of oocyte recovery for in vitro fertilization and production of embryos. In order to adjust the methodology, a field trial was performed using lactating Holstein cows (n=8) as oocyte donors. Punctures were done with an ultrasound device equipped with a 7.5 MHz intravaginal sectorial probe. Oocytes recovered were matured, fertilized and cultured in vitro, and embryos produced transferred to recipients heifers. On July, 2000, the first calf produced by these techniques in Minas Gerais State, Brazil, was born.

O objetivo deste experimento foi o de avaliar o efeito de sistemas de cultivo e de diferentes células somáticas e soro bovino na co-cultura sobre a produção de embriões bovinos fecundados in vitro. No experimento um avaliou-se o efeito do sistema de co-cultura com células da tuba uterina e do sistema "definido". No experimento dois utilizaram-se células da granulosa ou da tuba uterina para a co-cultura em meio CR1aa (Charles Rosenkrans). No experimento três utilizou-se soro de vaca em cio (SVC) ou soro fetal bovino (SFB), ambos em co-cultura com células da granulosa em CR1aa. Os ovócitos utilizados foram obtidos de ovários colhidos em matadouro e maturados in vitro em meio 199 com soro de vaca em cio e FSH por 24h. Após a maturação, os ovócitos foram fecundados in vitro por 22h e posteriormente divididos aleatoriamente nos tratamentos. Avaliaram-se a taxa de clivagem no dia três do cultivo, a produção de blastocistos nos dias sete e oito, e de blastocistos eclodidos nos dias nove e dez. Não houve diferença entre os sistemas em co-cultura e "definido" quanto à taxa de clivagem (80,7% e 75,4%) e de produção de blastocisto (19,4% e 17,7%). Entretanto, a taxa de blastocistos eclodidos foi superior para o sistema em co-cultura (37,5%) quando comparado com o sistema "definido" (8,7%). O cultivo embrionário em células da tuba uterina ou da granulosa resultaram em taxas de clivagem, produção de blastocisto e blastocistos eclodidos semelhantes entre si (65,5% e 66,7% de clivagem, 11,6% e 13,7% de blastocistos e 23,1% e 50,0% de blastocistos eclodidos; P>0,05), bem como o cultivo com SFB ou SVC (63,9% e 70,2% de clivagem, 14,3% e 8,7% de blastocisto e 41,2% e 33,3% de blastocistos eclodidos; P>0,05). Conclui-se que o sistema de cultivo "definido" pode ser utilizado para estudos com cultivo de embriões in vitro, no entanto, os resultados quanto à taxa de eclosão ainda são inferiores ao sistema em co-cultura. As células da granulosa e da tuba uterina possuem efeito semelhante sobre o desenvolvimento embrionário, assim como o soro de vaca em cio e o soro fetal bovino, quando em co-cultura.

The aims of this study were to evaluate the effects of culture system and different somatic cells and bovine serum in co-culture on in vitro production of bovine embryos. On the first experiment oviduct epithelial cells for co-culture system in CR1aa (Charles Rosenkrans) medium for "defined" system were studied. On the second experiment granulosa or oviduct epithelial cells, both in CR1aa medium were used. On the third experiment estrous cow serum (ECS) or fetal calf serum (FCS), both in granulosa cells co-culture in CR1aa medium was used. Bovine cumulus-oocytes complexes, obtained from ovaries collected at slaughterhouse, were matured in vitro in medium 199 added with ECS and FSH for 24h. Right after, the oocytes were fertilized in vitro for 22h and randomly divided in the treatments of the experiments. The cleavage rate was evaluated on day three, the blastocyst production on seventh and eighth days and the hatched blastocysts on ninth and tenth days. No differences were obtained (P>0.05) between co-culture and "defined" systems on the cleavage rate (80.7% and 75.4%) and on the blastocysts production (19.4% and 17.7%). However, the hatched blastocyst rate was higher (P<0.05) in the co-culture than in the "defined" system (37.5 and 8,7%, respectively). Similar results of embryo co-culture in oviduct epithelial and granulosa cell cultures were obtained regarding to similar cleavages, blastocyst and hatched blastocyst rates (65.5% and 66.7% of cleavage, 11.6% and 13.7% of blastocyst and 23.1% and 50.0% of hatched blastocyst; P>0.05), as well as with FCS and ECS (63.9% and 70.2% of cleavage, 14.3% and 8.7% of blastocyst and 41.2% and 33.3% of hatched blastocyst; P>0,05). The results show that the "defined" system can be used for in vitro embryo culture studies. Nevertheless, the hatched blastocyst rate was higher in co-culture system. Granulosa and oviduct epithelial cells had similar effects on the in vitro embryonic development. Similar results were also obtained using estrous cow serum and fetal calf serum, when in granulosa cells co-culture.

Estudaram-se os efeitos da concentração espermática e do tempo de incubação do sêmen com ovócitos, durante a fecundação in vitro, sobre as taxas de penetração espermática, de fecundação monoespermática e de clivagem, utilizando-se sêmen de touros da raça Gir. Ovócitos (n=817) maturados in vitro foram distribuídos em tratamentos visando à fecundação in vitro (FIV), em um delineamento fatorial 2×2×2, com duas concentrações espermáticas (2 e 4×10(6) espermatozóides/ml), dois períodos de incubação (12 e 18h) e dois touros (A e B). Espermatozóides viáveis foram obtidos pela técnica de swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5% de CO2 em ar atmosférico e 95% de umidade, a 39ºC. Após inseminação, 359 ovócitos foram fixados e corados para determinação das taxa de penetração e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da tuba uterina e TCM-199 por 72h, avaliando-se a clivagem. As taxas de penetração, fecundação monoespermática e clivagem não foram influenciadas (P>0,05) pela concentração espermática e pelo período de incubação. O touro B produziu maiores taxas (P<0,05) de penetração e de clivagem (83,3 e 81,0%, respectivamente) do que o touro A (66,5 e 64,0%). Houve tendência do touro B apresentar maior taxa de polispermia (P=0,067) do que o touro A (16,4 e 6,2 %, respectivamente). As interações entre tratamentos não foram significativas (P>0,05). O efeito touro sobre a capacidade de fecundação dos espermatozóides deve ser considerado quando da fecundação in vitro.

The aim of this study was to evaluate the effects of differents sperm concentration and incubation time during in vitro fecundation on sperm penetration, monospermic fecundation and cleavage rates, using sperm of Gyr bulls. In vitro matured oocytes (n=817) were distributed into treatments to in vitro fertilization (IVF) in a factorial design, with two sperm concentration (2 and 4×10(6) spermatozoa/ml), two incubation time (12 and 18h) and two bulls (A and B). Viable spermatozoa were obtained by swin-up. The IVF was realized in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5% CO2 and 95% humidity in air, at 39ºC. After insemination, 359 oocytes were fixed and stained to determine penetration and polyspermy rates. The remainder were co-cultivated in bovine oviduct epithelial cells and TCM-199, for 72h, to evaluate cleavage rate. The penetration, monospermic fecundation, and cleavage rates were not affected (P>0.05) by sperm concentration and incubation time. Higher (P<0.05) penetration and cleavage rates were observed for bull B (83.3 and 81.8%, respectively) than for bull A (66.3 and 64%, respectively). Bull B showed a tendency to present higher (P<0.07) polyspermy than bull A (16.4 and 6.25, respectively). No interactions among treatments were observed.

Estudou-se o efeito de diferentes concentrações espermáticas de sêmen de touro da raça Guzerá, durante a fecundação in vitro, sobre a taxa de clivagem embrionária. Ovócitos (n=356) obtidos de folículos de ovários oriundos de matadouro foram maturados in vitro e divididos aleatoriamente em quatro tratamentos visando a fecundação in vitro, de acordo com as concentrações espermáticas: TI (0,5× 10(6) espermatozóides/ml), TII (1,0× 10(6) espermatozóides/ml), TIII (2,0x10(6) espermatozóides/ml) e TIV (4,0× 10(6) espermatozóides/ml). Utilizou-se sêmen congelado de um único touro da raça Guzerá, preparado pela técnica de swim up, seguida de centrifugação, antes de ser adicionado ao meio de fecundação in vitro. Ao término do período de fecundação, os ovócitos foram cultivados por três dias em TCM 199, com células da tuba uterina, nas mesmas condições da fecundação. Após o swim up, foram recuperados 10,21± 0,98% dos espermatozóides inicialmente colocados e a motilidade aumentou de 67,5± 2,5% para 81,25± 2,4%. A taxa de clivagem foi de 31,0% (n=71), 44,7% (n=85), 55,9% (n=127) e 52,0% (n=73) em TI, TII, TIII e TIV, respectivamente. O TI apresentou taxa de clivagem inferior aos tratamentos TIII e TIV (P<0,05). Os resultados sugerem que as melhores concentrações espermáticas para a fecundação in vitro estão a partir de 1,0× 10(6) espermatozóides/ml, sendo a concentração de 0,5× 10(6) espermatozóides/ml não recomendada para esse processo.

The aim of this study was to evaluate the effect of different sperm concentrations of Guzera bull semen during in vitro fertilization on the cleavage rate. Oocytes (n=356) obtained from a slaughterhouse ovaries, were in vitro matured and randomly divided into four treatments for in vitro fertilization, according to sperm concentrations: TI (0.5× 10(6) spermatozoa/ml); TII (1.0× 10(6) spermatozoa/ml); TIII (2.0× 10(6) spermatozoa/ml) e TIV (4.0× 10(6) spermatozoa/ml). Frozen semen from one Guzera bull was used for in vitro fertilization. The live sperms were separated by swim up, washed once by centrifugation, and then placed in in vitro fertilization media. The in vitro fertilization was performed in tubes in media with heparin and incubated in 5% CO2, at 39ºC for 20h. Thereafter, the oocytes were washed in Talp Hepes medium and cultured during three days in TCM 199 and bovine oviduct epithelial cells, at the same conditions of in vitro fertilization. From the spermatozoa used at the beginning of swim up, 10.21± 0.98% were recovered, and the motility increased from 67.5± 2.5% to 81.25± 2.4%. The cleavage rates were 31,0% (n=71), 44.7% (n=85), 55.9% (n=127), and 52.0% (n=73) for TI, TII, TIII, and TIV, respectively. The cleavage rate in TI was lower than in TIII and TIV (P<0.05). These results suggest that the best spermatic concentration during the in vitro fertilization, with Guzera bull semen, is above 1.0× 10(6) spermatozoa/ml. Sperm concentration of 0.5× 10(6) spermatozoa/ml was not efficient in this trial.